实验动物镇静、止痛、麻醉和安乐死指南.docx
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实验动物镇静、止痛、麻醉和安乐死指南 1 目的：规范实验动物镇静剂、麻醉剂和止痛剂的使用。以及实验动物安乐死方法， 确保人道的处理动物。 2 范围：根据 AAALAC 要求，参考 Laboratory Animal Anaesthesia 和 AVMA Guidelines on Euthanasia 推荐的动物安乐死方法制定本使用指南。 对于给药方式说明：IP----腹腔注射 SC----皮下注射 IM----肌肉注射 IV----静脉注射 PO----口服 3 设备与材料：CO2 气瓶；配带盖和各种动物品种大小的麻醉诱导箱；麻醉机；注射剂 或吸入剂；适当规格的注射器和针；个人防护装备至少包括防护服、手套、帽子和口罩等。 4．步骤： 4.1 麻醉规程 麻醉时应认真检查所用的麻醉/止痛剂的有效使用日期，不可以使用过期的药物。 从开始麻醉到动物清醒必须对动物进行实时监护。麻醉的动物会反应迟钝、无方向感， 所以麻醉时应将动物放置笼中或采取适当的措施防止动物造成损伤。动物完全麻醉（完全失 去意识）方可开始手术。 麻醉期间应注意对动物采取适当的保温措施，如电热毯或红外线加热灯，防止动物体 温降低。 4.2 对麻醉程度的检测 如果动物有翻身反应或对疼痛和刺激发生反应，如表现蠕动、移动、收回肢体，则手 术必须延迟进行。 深度疼痛测试，用手指挤压动物的后肢脚趾，如果动物有反应如缩回后肢，则动物意 识未完全消失；如果动物对测试无反应，则为无意识或意识消失，麻醉达到手术要，可以开 始手术。 外科手术开始时，动物应充分松弛、对疼痛刺激无反应、呼吸和心率正常。 4.3 设施 在动物房或手术室实施麻醉。但麻醉时应尽量不要在其它动物听到、看见和闻到的区域 进行。 4.4 局部麻醉 局麻是在小的非创伤性手术时，减轻动物痛苦而采取的措施。局麻的选择将取决于手 术所需时间的长短、场所和动物品种。常用的局麻药有盐酸利多卡因和盐酸普鲁卡因。 4.5 剂量计算 根据动物的体重，计算麻醉药合适的给药剂量。 例如，用氯胺酮+安定麻醉 300g 的大鼠 氯胺酮的剂量是 75mg/kg，安定是 5mg/kg 因此，0.300kg×75mg/kg=22.5mg 氯胺酮 0.300kg×5mg/kg=1.5mg 安定 4.6 根据动物品种选择麻醉药物、剂量和给药途径 吸入麻醉剂（如异丙烷）所有品种的动物均适用。钢瓶中压缩 CO2 气体与氧气 （50:50）混合至 100%的 CO2 可以用于啮齿类动物短期吸入麻醉剂。 4.7.1 CO2 麻醉 CO2 诱导短暂的失去意识并适用于某些实验过程，如眼眶后静脉丛采血和一些注射。 每次只麻醉一只动物。 使用一个与氧气未混合的 CO2 相连的容器。打开气瓶的主要阀门，通过微调从而调整 气体压力。把动物放进气体流动的容器并关上容器盖子。离开动物 1-3/2 分钟直到动物呼吸 缓慢和无意识，从容器中取出动物开始实验。动物将维持 20-30 秒无意识状态。如果需要再 麻醉 20 秒，追加一次麻醉剂量，不可以连续超过 2 次追加 CO2 麻醉。动物在容器中不可以 放置超过 5/2 分钟。 动物将完全恢复，动物一恢复意识就放回原笼中。 在动物放进容器前，通过往眼里滴一滴盐酸丙对卡因更有宜于眼眶后静脉丛采血。局 麻可以使动物减少对操作的敏感性并延长动物失去意识的时间，动物大约 10 秒钟就失去意 识。先于采血前眼睛用薄纸擦拭以除去残余的盐酸丙对卡因。 4.7.2 常用的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法 4.7.2.1 小鼠的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法 4.7.2.1.1 小鼠镇静剂和诱导麻醉药物的选择 术前诱 导麻醉 药物 剂量 给药 方式 效果 阿托品 0.04 mg/kg SC or IP 抗胆碱能作用；减少唾液，呼吸道分泌物，阻止血管迷 走神经反射 安定 5 mg/kg IP 轻微镇静作用；不能止痛 氟胺酮 0.1-0.3 ml/kg IP 轻度镇静，中度止痛； 氯胺酮 100-200 mg/kg IM 深度镇静，轻微止痛；缺乏肌肉松弛作用 4.7.2.1.2 小鼠麻醉药物的选择 注射用麻 醉剂 剂量 给药方 式 麻醉深度(轻 度/外科麻醉) 持续时间 (min) 恢复时间(min) 氯胺酮﹠安 定 100mg/kg﹠5mg/kg IP 保定/麻醉 20-30 60-120 丙泊酚 26mg/kg IV 外科麻醉 5-10 10-15 氟胺铜﹠安 定 0.4ml/kg&5mg/kg IP or IP 外科麻醉 20-40 120-240 丙泊酚 26mg/kg(然后 2-2.5mg/kg/min) IV 外科麻醉 1-12hours 10-15 异氟烷 0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度 2%) 吸入 外科麻醉 -- -- 三溴乙醇 （阿弗丁) 125-240 mg/kg(使用 浓度 0.25%) IP 外科麻醉 15-45 60-120 注：100%阿佛丁（三溴乙醇+叔戊醇=1:1 配成）；使用时用生理盐水进行稀释使用。 异氟烷使用需要面罩。 4.7.2.1.3 小鼠止痛药物的选择 止痛剂 剂量 给药方式 效果 效果持续时间 阿司匹林 120 mg/kg PO 轻微止痛 - 丁丙诺啡 0.05-0.1mg/kg SC 中等止痛 8-12 Hours 卡洛芬 5 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours 美洛昔康 5 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours 4.7.2.1.4 小鼠安乐死的药物和方法选择 药物或方 法 剂量 试用动 物 备注 戊巴比妥 钠 100-200 mg/kg 所有小 鼠 可接受方法 CO2 ---- 成年小 鼠 可接受方法；幼龄动物和新生动物需要延长时间 颈椎脱臼 ---- 所有小 鼠 条件可接受；操作人员需要接受培训，并具备熟练 的技术 4.7.2.2 大鼠的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法 4.7.2.2.1 大鼠镇静剂和诱导麻醉药物的选择 术前诱导 麻醉药物 剂量 给药方 式 效果 阿托品 0.05 mg/kg SC or IP 抗胆碱能作用；减少唾液，呼吸道分泌物，阻止 血管迷走神经反射 氟胺酮 0.2-0.5 ml/kg IM 轻度/中度镇静，中度止痛； 安定 2.5-5 mg/kg IP or IM 轻微镇静作用；不能止痛 氯胺酮 50-100 mg/kg IP or IM 深度镇静，轻微止痛；缺乏肌肉松弛作用 4.7.2.2.2 大鼠麻醉药物的选择 注射用 麻醉剂 剂量 给药 方式 麻醉深度（轻度 /外科麻醉） 持续时 间 min 恢复时 间 min 氯胺酮﹠安定 75mg/kg﹠5mg/kg IP 轻度麻醉 20-30 120 丙泊酚 10 mg/kg IV 外科麻醉 5 10 氟胺铜﹠安定 0.6ml/kg﹠ 2.5mg/kg IP or IP 外科麻醉 20-40 120-240 丙泊酚 10-12mg/kg（然后 0.5-1.0mg/kg/min） IV 外科麻醉 1-12 hours 10-15 异氟烷 0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度 2%) 吸入 外科麻醉 -- -- 三溴乙醇（阿弗丁） 300 mg/kg IP 外科麻醉 10-20 45-90 注：100%阿佛丁（三溴乙醇+叔戊醇=1:1 配成）；使用时用生理盐水进行稀释使用。 异氟烷使用需要面罩。 4.7.2.2.3 大鼠止痛药物的选择 止痛剂 剂量 给药方式 效果 效果持续时间 阿司匹林 100 mg/kg PO 中等止痛 - 卡洛芬 5 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours 美洛昔康 5 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours 丁丙诺啡 0.01-0.05mg/kg SC or IV 中等止痛 8-12 Hours 丁丙诺啡 0.1-0.25mg/kg PO 中等止痛 8-12 Hours 4.7.2.2.4 大鼠安乐死的药物和方法选择 药物或 方法 剂量 试用动物 备注 戊巴比 妥钠 100-200 mg/kg 所有大鼠 可接受方法 CO2 ---- 成年大鼠 可接受方法；幼龄动物和新生动物需要延长时间 颈椎脱 臼 ---- 体重＜200g 条件可接受；操作人员需要接受培训，并具备熟练的 技术颈椎脱臼前需要进行麻醉处理 4.8 保存记录 需要所有麻醉程序的手写记录文件。记录应该包括但不仅局限于以下几点： IACUC 动物使用和管理方案编号 麻醉日期、时间和负责人签字 品系和个体或动物组别标记 使用的麻醉剂、止痛剂或镇静剂名称、剂量、给药途径和时间 如果需要在整个过程中监测生理参数（如心率、呼吸次数/节律、体温、粘膜色泽和足 部的松弛度等） 4.9 术后恢复 动物可与正处于恢复期的同一品系动物放在一个笼具中，也可单独放在一个饲养笼内， 但不要与未麻醉的动物放在一起，防止恢复期动物受伤。动物恢复期必须保温。当动物恢复 正常活动时，可以与其它动物放回同一笼或一个动物房间。随后几天必须定时对动物进行观 察保证不出现并发症。